文章摘要
新型鹅星状病毒ORF2蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及间接ELISA检测方法的建立
Expression of Novel Goose Astrovirus ORF2 Protein in Baculovirus Expression System and the Establishment of Indirect ELISA
  
DOI:doi:10.3969/j.issn.1005-7021.2024.05.004
中文关键词: 鹅星状病毒  重组杆状病毒  ORF2蛋白  间接ELISA  抗体检测
英文关键词: goose astrovirus  recombinant baculovirus  ORF2 protein  indirect ELISA  antibody detection
基金项目:江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(22)2047);江苏省高等学校优势学科建设项目
作者单位
张辛耘 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
陈连颐 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
任丹 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
谢泉 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
万志敏 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
李拓凡 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
叶建强 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
高巍 1.扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏 扬州 2250092.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏 扬州 2250093.扬州大学 农业科技发展研究院江苏 扬州 2250094.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏 扬州 2250095.江苏省家禽科学研究所江苏 扬州 225009 
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中文摘要:
      为建立检测新型鹅星状病毒(Goose Astrovirus,GAstV)抗体快捷特异方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了GAstV重组ORF2蛋白,并以纯化的ORF2蛋白作为包被抗原,通过反应条件的摸索,建立了一种检测GAstV抗体的间接ELISA方法。经特异性和重复性试验证明,建立的间接ELISA仅与GAstV阳性血清反应,而与其他鹅易感病毒的阳性血清无交叉反应,且批间和批内重复性变异系数均低于10%;在灵敏度分析中,ELISA检测的灵敏度可达IFA的4倍;临床样品检测结果显示,该ELISA方法与IFA检测的符合率达89.8%。上述结果表明,本研究在杆状病毒中成功表达了GAstV的ORF2蛋白,且建立了具有良好的特异性、敏感性和重复性的间接ELISA方法,为GAstV的临床感染检测和血清学流行病学调查提供了一种准确、快速和经济的检测方法,为开发临床适用的检测试剂盒提供了参考。
英文摘要:
      In order to establish a serological detection method for goose astrovirus (GAstV) antibodies, recombinant ORF2 protein from GAstV was successfully expressed by insect baculovirus expression system, and an indirect ELISA method for detecting GAstV antibody was established with ORF2 protein as coating antigen. With proved by specificity and repeatability tests, the established indirect ELISA only reacted with the positive serum of GAstV, but not with the positive serum of other goose susceptible viruses, and inter-and-intra batches of assay repeatability coefficients of variation were below 10%. Sensitivity analysis showed that the sensitivity of ELISA was four times as high as IFA. The clinical sample test results showed that the accordance rate of the ELISA method was as high as 89.8% of the IFA accordance rate. All the above results suggested that the ORF2 protein of GAstV was successfully expressed in baculovirus. It is confirmed that the indirect ELISA method for detecting serum antibody of GAstV established in this study has fine specificity, sensitivity and repeatability, and provided an accurate, rapid and economic testing method for clinical infection detection of GAstV, and can be developed as a detection kit for clinical application and provided a technical to rely on for the development of clinically applicable detection kits.
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