文章摘要
牛樟芝倍半萜合酶基因克隆及在不同培养基中的表达
Clone and Expression of Sesquiterpene Synthase Gene of Antrodia camphorata in Different Media
  
DOI：doi:10.3969/j.issn.1005-7021.2017.05.003
中文关键词: 牛樟芝  倍半萜合酶  基因克隆  基因表达
英文关键词: Antrodia camphorata  sesquiterpene synthase  gene cloning  gene expression
基金项目:云南省对外科技合作计划项目（2015IA004)；国家自然科学青年科学基金项目（31400488）；云南省面上项目（2016FB055）；云南省重点实验室开放基金项目（ZZCX2016-11）
作者单位
赵能 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；3.西南林业大学，云南 昆明 650224 
陈中华 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；2.云南省林业科学院 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室，云南 昆明〓650204 
原晓龙 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；2.云南省林业科学院 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室，云南 昆明〓650204 
王娟 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；2.云南省林业科学院 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室，云南 昆明〓650204 
杨宇明 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；2.云南省林业科学院 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室，云南 昆明〓650204 
王毅 1.云南省林业科学院 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室，云南 昆明 650204；2.云南省林业科学院 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室，云南 昆明〓650204 
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中文摘要:
      牛樟芝（Antrodia camphorata）是一种珍稀食药用菌，能产生具有抗癌活性的倍半萜类化合物。对牛樟芝基因组进行分析，获得倍半萜合酶基因序列并设计特异引物，提取在Glu培养基（麦芽浸粉6 g/L，酵母提取物3 g/L，葡萄糖40 g/L）上生长的牛樟芝菌丝体的RNA，利用RT-PCR技术克隆得到倍半萜合酶基因AcTPS1。AcTPS1基因cDNA全长为969 bp，编码323个氨基酸，根据系统进化树可知AcTPS1氨基酸序列与其他9种真菌倍半萜合酶聚为一类。AcTPS1拥有典型倍半萜合酶的结构域（RRSRSATAEAYACFIW），之后检测AcTPS1在不同培养基上的菌丝中的表达结果显示不同碳源中，只有葡萄糖作为碳源时该基因表达，不同氮源中，以番茄浸粉和酪蛋白胨为氮源时该基因表达。说明AcTPS1是一类诱导型表达的基因。为利用发酵培养以及异源表达手段获得牛樟芝活性化合物提供参考。
英文摘要:
      Antrodia camphorata was rare edible and medicinal fungi and that could produce sesquiterpene compounds with anti cancer activity. In this study, A. camphorata of genome was analyzed, then sesquiterpene synthase gene sequence was obtained and specific primers were designed according to this sequence. The RNA of A. camphorata mycelium grew on the Glu medium (malt powder 6 g/L, yeast extract 3 g/L, glucose 40 g/L) was extracted. The sesquiterpene synthase gene of AcTPS1 was cloned by RT-PCR which full length of cDNA was 969 bp, this sequence could encode 323 amino acids. According to phylogenetic tree, the amino acid sequence of AcTPS1 was clustered with other 9 sesquiterpene synthases which had a typical sesquiterpene synthase domain (RRSRSATAEAYACFIW). The expression level of AcTPS1 in mycelia on different media was shown, gene was expressed only when glucose was used as the carbon source among the different carbon sources, the gene also expressed when tomato powder and casein peptone as the nitrogen source in different nitrogen sources. Indicated that AcTPS1 is a number of inducible type of expression genes. This research make an important theoretical foundation to obtain active compounds from A. camphora using fermentation cultivation method and heterologous expression measurement.
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